RNA免疫沉淀测序
这个就是ChIP-seq的RNA版。
RNA免疫沉淀测序用来定位蛋白质与RNA结合的位置。在该方法中,用特定的蛋白抗体来对RNA-蛋白复合物进行免疫沉淀。 RNA酶消化后,提取蛋白质覆盖的RNA并逆转录成cDNA。 然后将位置映射回基因组。
技术优点:
- 可以针对特异性(研究需要)的蛋白-RNA复合物。
- 由于使用RNase消化,可以得到背景噪声低,高分辨率的绑定位点信息
- 不需要任何关于RNA的具体先验知识(不需要提前知道需要的是哪些RNA序列)
- 全基因组范围的RNA搜索
技术缺点:
- 需要特定蛋白质的抗体
- 非特异性抗体将沉淀非特异性复合物
- 复合物若缺乏crosslink或者稳定性,会造成假阴性
- RNase消化过程必须仔细控制