HITS-CLIP 和 CLIP-seq 可以用于定位体内的蛋白质RNA相互作用位点。这个测序技术同RIP-seq类似,但是用交联来固定蛋白质RNA复合物。方法是将RNA蛋白质复合物用紫外线交联并做免疫沉淀。复合物经过RNA酶和蛋白酶K的处理,然后提取RNA,并逆转录成cDNA,测序结果可提供精确到单碱基的蛋白质与RNA结合信息。

HITS-CLIP_and_CLIP-seq

技术优点:

  1. 用交联来固定蛋白质的靶向结合位点
  2. 紫外线交联可以应用于实验材料体内
  3. 由于使用RNA酶消化,可以得到低噪声高分辨率的结合位点
  4. 不需要对所研究的RNA结合信息有先验了解
  5. 全基因组水平的RNA扫描

技术缺点:

  1. 没有特异性靶标的抗体可能会结合非特异性的复合物
  2. 紫外线交联不是非常有效,需要蛋白质和RNA近距离结合,远距离的可能会无法形成复合物
  3. 交联步骤可能会引入外源污染物