GRO-seq测序技术
GRO-seq(Global Run-On Sequencing)测序技术可以在整个基因组范围上绘制参与转录的RNA聚合酶的位置、数量并进行定位。在这个技术下,激活的RNA聚合酶II可以在有Br-UTP(Br标记的三磷酸尿苷)的条件下继续反应,RNA会水解并被有Brd-UTP抗体的磁珠抓住(纯化)。洗下来的RNA在逆转录成cDNA前要进行去帽处理和末端修复。对于cDNA的测序结果反映了正在细胞内被RNA聚合酶II转录的RNA。
技术优点:
- 可以map正在转录中的RNA聚合酶II的位置
- 确定转录位点的相对活性
- 检测正义和反义转录
- 检测全基因组转录
- 不需要已知转录位点的位置
技术缺点:
- 由于必须在存在标记核苷酸的情况下进行转录,该方案仅限于细胞培养物和其它人造系统
- 在准备核苷酸的过程中可能会有人造添加剂的干扰
- 新的转录起始事件可能会在转录时发生 (New initiation events may occur during the run-on step) 没能理解这句话的含义。
- 物理障碍可能阻断聚合酶的活动